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病毒清除驗證指導原則及國內外申報差異

醫藥 來源:生物制品圈

生物藥在我國已經形成“燎原之勢”,各種生物仿制藥、創新藥的研發、生產不斷地出現在市場上。根據《藥品注冊管理辦法》的要求,由人的、動物的組織或者體液提取的制品、動物源性單克隆抗體及真核細胞表達的重組制品,尚需增加病毒滅活工藝驗證資料。

2017年,國家食品藥品監督管理總局發布了《藥品生產質量管理規范》生化藥品附錄的公告(2017年第29號),作為《藥品生產質量管理規范(2010年修訂)》配套文件。


《生化藥品附錄》(以下簡稱《附錄》)進一步對生化藥品的范圍進行了規范。生化藥品是指從動物的器官、組織、體液、分泌物中經前處理、提取、分離、純化等制得的安全、有效、質量可控的藥品。主要包括:蛋白質、多肽、氨基酸及其衍生物、多糖、核苷酸及其衍生物、脂、酶及輔酶等。

《附錄》的第五章部分對病毒去除/滅活及驗證的必要性、適用性、有效性等提出具體的要求,明確基于風險控制原則,結合品種特性和原材料來源,采用有效去除/滅活病毒工藝步驟和方法。病毒去除/滅活的同時,不應對產品質量有不良影響。在生產工藝發生變更時,應重新評估病毒去除/滅活工藝的適用性。并且病毒去除/滅活驗證不能代替原材料及生產過程的質量管理要求。

《附錄》中提到“病毒去除/滅活工藝的有效性驗證可參照有關病毒去除/滅活技術方法和指導原則等相關規定。”這里提到的“有關原則”大多數參考藥品評審中心2007年發布的《生物組織提取制品和真核細胞表達制品的病毒安全性評價技術審評一般原則》(以下簡稱一般原則)以及2002年發布的《血液制品去除滅活病毒技術方法及驗證指導原則》。

在《一般原則》中,指出了病毒安全性控制的迫切性以及適用范圍,對病毒污染的可能來源進行分析,根據病毒的不同來源采取不同的控制和檢測方法,并對病毒去除/滅活驗證研究及有效工藝步驟的評價提出基本原則和方法。

在國內進行新藥申報時提交的病毒清除驗證以《生物組織提取制品和真核細胞表達制品的病毒安全性評價技術審評一般原則》及《血液制品去除/滅活病毒技術方法及驗證指導原則》為主。如果需要在國外申報或中外雙報,則需以《ViralSafety Evaluation of Biotechnology Products Derived from Cell Linesof Human or Animal Origin》、《Pointsto consider in the characterization of cell lines used to producebiologicals》、《Guidelineon Virus Safety Evaluation of biotechnological InvestigationalMedicinal Products》為主。

指導原則的不同必然造成國內外申報存在一些差異,具體主要有以下三個方面:

1、指示病毒的差異

國內的指導原則要求比較詳細具體,明確指出了病毒的類型。規則要求:“一個典型的驗證研究所選擇的病毒,至少應包括單鏈和雙鏈的RNA及DNA、脂包膜和非脂包膜、強和弱抵抗力、大和小顆粒等病毒;去除/滅活技術方面可根據采用的具體方法選擇恰當的適宜病毒,例如SD法可選用脂包膜病毒,膜過濾法可選用粒徑小的病毒,加熱法可選用脂包膜和非脂包膜病毒,低pH孵放法可選用對理化因素比較耐受的指示病毒等。”

當然,選擇指示病毒的核心需要以生物組織原材料、種子細胞或組織原材料勻漿、培養細胞結束時的混懸液中可能出現的污染病毒為主,結合能夠用于評價驗證效果的指示病毒的可獲得性與相關培養試驗條件進行合理選擇。

國外規則沒有寫明病毒的具體要求,僅要求盡可能選擇污染產品最相似的病毒進行驗證,即特異性指示病毒;同時需要關注理化性質較寬的非特異性病毒。沒有像CFDA中那樣詳細描述病毒的特點。


表.國內外申報中病毒選擇差異

2、工藝選擇上的差異

國內IND申報時,一般選擇低pH和膜過濾這兩個工藝。國外進行申報時,除了選擇低pH和膜過濾這兩個工藝,還需進行層析工藝。


圖.低pH孵育滅活病毒動力學曲線圖

低pH處理法屬于化學病毒去除/滅活的一種,原理是利用病毒表面的抗原在低pH值的條件下,電荷發生改變,蛋白質的空間結構也發生不可逆的改變,從而使病毒喪失與細胞受體結合的能力,阻止其侵染細胞。常用于單克隆抗體的病毒滅活工藝。一般選擇3-3.7的pH處理2-24h。

膜過濾工藝是一種物理病毒去除/滅活方法,原理是選擇孔徑比病毒有效直徑小的濾膜,對產品進行處理,將病毒與產品分離。膜過濾不能單獨使用,需要與其他方法聯合使用。在病毒驗證時,需要綜合考慮蛋白溶液的濃度、濾速、壓力和過濾量等重要參數。

層析法最常用的是親和層析和離子交換層析。層析法是目前常用的樣品不同組分分離技術,利用各組分與固定相親和力的差異或相互作用不同的原理,實現病毒與樣品分離的目的。

3、在工藝重復性方面的差異

國內的指導原則雖然沒有硬性的規定,但通常需要做三個批次。在國外的指導原則中,明確指出至少分別做兩次獨立的研究來證實清除的可重復性,因此一般是一批樣品重復兩次。

病毒去除/滅活工藝驗證流程涉及多個方面,比如指示病毒的選擇,驗證方案的選擇,清除效果的判定,以及統計處理分析等。

來源:生物制品圈

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